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COL8A2CRISPR激活质粒(h) | sc-403831-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
COL8A2 编码 VIII 型胶原 α2 链,这是一种非纤维性短链胶原,参与细胞外基质的组织以及与基底膜相关结构的构建。在眼部组织中,COL8A2 在角膜内皮和 Descemet 膜(后弹力层)中表达富集,可支持基质装配、细胞黏附以及生物力学完整性。由 COL8A2 介导的基质重塑与调控细胞—基质信号传导的通路相互关联,包括整合素介导的黏附和细胞外基质周转。COL8A2 的遗传变异或异常表达与角膜内皮营养不良相关,因此是研究细胞外基质稳态与内皮细胞功能的重要靶点。
COL8A2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性COL8A2的表达。
COL8A2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的COL8A2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于COL8A2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性COL8A2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的COL8A2位点,并能够研究内源性位点上依赖于COL8A2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在COL8A2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟COL8A2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。