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COL12A1CRISPR激活质粒(h) | sc-402361-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
COL12A1 编码 XII 型胶原 α1 链,属于三股螺旋结构间断的纤维相关胶原(FACIT)。该蛋白定位于细胞外基质,可与含 I 型胶原的胶原原纤维结合,从而调控原纤维形成、基质组织结构以及组织的力学特性。COL12A1 在结缔组织中富集,并在发育与修复过程中参与细胞-基质黏附、机械信号转导以及协调性的组织重塑。COL12A1 的表达或功能异常与遗传性结缔组织疾病相关,这类疾病常表现为肌肉骨骼表型,反映其在肌腱/韧带完整性以及软骨-骨界面中的作用。在肿瘤生物学与纤维化重塑研究中,COL12A1 常作为基质来源的细胞外基质成分被研究,并与基质硬度增加及促侵袭的微环境相关。
COL12A1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性COL12A1的表达。
COL12A1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的COL12A1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于COL12A1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性COL12A1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的COL12A1位点,并能够研究内源性位点上依赖于COL12A1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在COL12A1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟COL12A1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。