CNT1CRISPR激活质粒(h): sc-404790-ACT

SLC28A1 编码浓集型核苷转运体1（CNT1）。CNT1 是一种高亲和力、钠依赖性的质膜转运蛋白，介导细胞摄取尿苷、胞苷等嘧啶核苷。通过调控核苷补救途径（salvage），CNT1 维持 DNA/RNA 合成、细胞周期进程以及应对代谢应激所需的核苷酸库稳态。CNT1 的活性与嘌呤/嘧啶代谢相互交叉，并可通过改变细胞内底物可用性，影响基于核苷类似物的实验性干预的敏感性。已有研究报道 SLC28A1 的表达失调存在于多种疾病背景中，包括与癌症相关的代谢重编程，因此其与转运体生物学、细胞增殖以及药物转运机制研究密切相关。

CNT1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SLC28A1的表达。

CNT1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的SLC28A1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于SLC28A1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性CNT1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的SLC28A1位点，并能够研究内源性位点上依赖于CNT1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SLC28A1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CNT1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。