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CLTCL1CRISPR激活质粒(h) | sc-401887-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 CLTCL1 基因编码网格蛋白重链样蛋白 1(CHC22)。CHC22 属于网格蛋白家族的包被蛋白,可组装成晶格结构以塑造膜形态,并在内吞及高尔基体后运输过程中驱动囊泡形成。CLTCL1 尤其与受调控的细胞内货物分选有关,涉及包括 GLUT4 的隔离与回收在内的通路,从而与葡萄糖稳态和代谢应激反应相联系。通过与适配蛋白及细胞骨架机制的协同作用,CLTCL1 影响货物选择性、囊泡成熟以及运输区室的空间组织。与 CLTCL1 相关的网格蛋白介导运输与货物回收失调已被认为与代谢表型有关,并与胰岛素响应性运输、膜动力学以及细胞信号输出等研究方向相关。
CLTCL1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CLTCL1的表达。
CLTCL1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CLTCL1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CLTCL1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性CLTCL1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CLTCL1位点,并能够研究内源性位点上依赖于CLTCL1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CLTCL1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CLTCL1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。