CLEC-2DCRISPR激活质粒(h): sc-412035-ACT

CLEC2D 编码 CLEC-2D，这是一种呈现在细胞表面的 C 型凝集素样配体，可通过与 NK 细胞受体（尤其是 NKG2D 和 CD161（KLRB1））的相互作用来调节免疫识别。通过在免疫突触处塑造激活性与抑制性信号传导，CLEC-2D 影响 NK 细胞的细胞毒作用、细胞因子释放，以及在炎症和肿瘤相关微环境中的更广泛免疫监视。其表达会随细胞应激与分化状态而动态调控，使 CLEC2D 与控制免疫逃逸、白细胞间串扰和组织稳态的通路相联系。多种恶性肿瘤与免疫介导性疾病中均有 CLEC2D 水平改变的报道，支持将其作为研究免疫逃逸、非抗原依赖性细胞毒作用以及免疫调节表型的分子抓手。

CLEC-2D CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CLEC2D的表达。

CLEC-2D CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CLEC2D基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CLEC2D转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性CLEC-2D表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CLEC2D位点，并能够研究内源性位点上依赖于CLEC-2D的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CLEC2D表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CLEC-2D通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。