claudin-1CRISPR激活质粒(h): sc-400609-ACT

CLDN1 编码 claudin-1，这是一种四跨膜的紧密连接蛋白。它通过调控细胞旁通透性以及连接链（junctional strand）的组装，帮助建立上皮屏障完整性和顶-底（apico-basal）极性。Claudin-1 参与紧密连接与黏着连接之间的串话（cross-talk），从而影响细胞骨架的组织以及与分化和应激反应相关的信号通路。CLDN1 的表达水平或定位发生改变，常与上皮稳态受损、细胞黏附与迁移变化，以及在炎症和肿瘤等背景下观察到的屏障功能障碍相关。作为紧密连接的组成成分，claudin-1 也常用于研究宿主–病原体相互作用以及组织特异性的通透性调控。

claudin-1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CLDN1的表达。

claudin-1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CLDN1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CLDN1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性claudin-1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CLDN1位点，并能够研究内源性位点上依赖于claudin-1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CLDN1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟claudin-1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。