citrate synthaseCRISPR激活质粒(h): sc-402227-ACT

人类 CS 基因编码柠檬酸合酶（citrate synthase），这是一种位于线粒体基质的酶，催化草酰乙酸与乙酰辅酶 A 缩合生成柠檬酸，从而启动三羧酸（TCA）循环。通过控制进入氧化代谢的入口，柠檬酸合酶支持 ATP 生成、补充反应（anaplerosis），并通过线粒体—胞质碳通量提供用于脂质和胆固醇生物合成的柠檬酸。CS 活性与线粒体生物发生、氧化还原稳态以及营养压力下的代谢适应密切相关。在神经退行性疾病、心代谢表型以及肿瘤代谢所伴随的代谢功能障碍与生物能量重塑等研究背景中，CS 表达改变或线粒体 TCA 循环功能异常常被重点关注。

citrate synthase CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CS的表达。

citrate synthase CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CS基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CS转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性citrate synthase表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CS位点，并能够研究内源性位点上依赖于citrate synthase的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CS表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟citrate synthase通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。