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CIDE-BCRISPR激活质粒(h) | sc-403808-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类基因 CIDEB 编码 CIDE-B 蛋白,属于 CIDE 家族成员,参与脂滴生物学、肝细胞脂质处理以及代谢稳态维持。CIDE-B 定位于与脂滴相关的膜结构,并与协调甘油三酯储存、脂解平衡以及在肝脏和脂肪相关情境中的能量代谢等过程有关。已有研究在血脂异常、肝脂肪变性以及更广泛的代谢疾病表型中报道了 CIDEB 表达改变;脂滴动力学的变化会影响胰岛素敏感性与炎症信号传导。作为连接脂质储存通路与细胞应激反应的机制节点,CIDEB 常被用于代谢重塑与器官特异性脂质沉积模型中的评估指标。
CIDE-B CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CIDEB的表达。
CIDE-B CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CIDEB基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CIDEB转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性CIDE-B表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CIDEB位点,并能够研究内源性位点上依赖于CIDE-B的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CIDEB表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CIDE-B通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。