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CHMP4BCRISPR激活质粒(h) | sc-401802-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 CHMP4B 编码 ESCRT-III 复合体的核心组分之一,该复合体会在内体膜上聚合,在多囊泡体(MVB)生成过程中驱动膜的收缩与切割。通过依赖 ESCRT 的转运途径,CHMP4B 有助于调控受体下调、溶酶体靶向以及信号复合体的周转,从而影响与生长因子信号传导和细胞稳态相关的通路。ESCRT-III 的活性还支持细胞分裂末期的胞质分裂断裂(abscission)阶段,并参与核膜重建与质膜修复。包括 CHMP4B 在内的 ESCRT 组分失调与内体-溶酶体系统动力学改变有关,并与神经退行性变、癌细胞信号传导以及病毒出芽机制等研究方向相关。
CHMP4B CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CHMP4B的表达。
CHMP4B CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CHMP4B基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CHMP4B转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性CHMP4B表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CHMP4B位点,并能够研究内源性位点上依赖于CHMP4B的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CHMP4B表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CHMP4B通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。