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Chk2双切口酶质粒(h) | sc-400438-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
Chk2双切口酶质粒(h2) | sc-400438-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
CHEK2 编码检查点激酶2(Chk2),是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,在DNA双链断裂发生后于ATM下游被激活。Chk2被磷酸化后,会通过p53、CDC25磷酸酶和BRCA1等底物传递DNA损伤信号,从而调控细胞周期检查点、DNA修复的协同以及细胞凋亡。该通路将基因组应激信号与复制控制整合起来,以在S期和有丝分裂过程中维持基因组完整性。CHEK2/Chk2信号失调以及遗传性或获得性变异与基因组不稳定表型和癌症易感性相关,因此它也是研究DNA损伤应答网络时常用的关键节点。
Chk2 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 CHEK2 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对CHEK2内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏CHEK2的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了CHEK2基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。