CHAC1CRISPR激活质粒(h): sc-403197-ACT

CHAC1（ChaC 谷胱甘肽特异性γ-谷氨酰环转移酶1）是一种可被应激诱导的酶，能够降解谷胱甘肽，从而将氧化还原稳态与氨基酸代谢以及细胞对氧化应激和内质网应激的适应联系起来。作为由ATF4驱动的整合应激反应（integrated stress response, ISR）的下游效应因子，CHAC1会影响活性氧（ROS）平衡、蛋白折叠能力以及细胞对应激相关命运程序的易感性。在涉及代谢应激与炎症的多种情境中（包括肿瘤生物学与神经退行性疾病模型），已有关于CHAC1表达改变的报道；在这些研究中，谷胱甘肽耗竭及与铁死亡（ferroptosis）相关的通路常被重点考察。调控CHAC1为研究谷胱甘肽周转如何重塑人类细胞中的信号网络、线粒体功能以及应激响应型转录程序提供了一种可行的方法。

CHAC1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CHAC1的表达。

CHAC1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CHAC1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CHAC1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性CHAC1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CHAC1位点，并能够研究内源性位点上依赖于CHAC1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CHAC1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CHAC1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。