CGRP2CRISPR激活质粒(h): sc-401165-ACT

人类 **CALCB** 基因编码降钙素基因相关肽 2（CGRP2）。CGRP2 属于降钙素基因家族产生的神经肽，通过 **CGRP 受体复合体**（由 **CALCRL** 与 **RAMP1** 组成）进行信号传导，从而调控 **cAMP 依赖性**通路。CGRP2 通过调节血管舒张、血管张力以及炎症性的神经源性信号传递，参与神经—血管之间的通讯，并可影响外周组织中平滑肌和免疫细胞的反应。CGRP 家族信号的失衡与痛觉处理改变及血管稳态异常有关，因此 CALCB 是研究感觉神经元生物学、内皮—神经元串扰以及炎性疼痛机制的重要靶点。在癌症及其他慢性疾病中，神经肽信号的变化可能重塑组织微环境和应激反应通路，因此在细胞—细胞通讯模型中研究 CALCB 具有意义。

CGRP2 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CALCB的表达。

CGRP2 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CALCB基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CALCB转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性CGRP2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CALCB位点，并能够研究内源性位点上依赖于CGRP2的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CALCB表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CGRP2通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。