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CGNL1CRISPR激活质粒(h) | sc-405346-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
CGNL1(cingulin-like 1)编码一种与紧密连接相关的支架蛋白,定位于上皮和内皮细胞的细胞-细胞接触处,帮助组织连接结构。它将连接复合体与肌动蛋白细胞骨架连接起来,并通过涉及 Rho 家族 GTP 酶信号传导和细胞骨架重塑的通路,参与屏障功能、细胞极性以及连接组装的调控。通过影响细胞旁通透性和依赖接触的信号传导,CGNL1 与组织完整性、炎症相关的屏障破坏以及塑造细胞迁移的微环境线索等研究密切相关。与 CGNL1 生物学相关的连接调控异常和细胞骨架动力学变化,常在上皮-间质转化、血管通透性以及癌症相关的黏附改变等背景下被研究。
CGNL1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CGNL1的表达。
CGNL1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CGNL1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CGNL1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性CGNL1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CGNL1位点,并能够研究内源性位点上依赖于CGNL1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CGNL1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CGNL1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。