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CEMIPCRISPR激活质粒(h) | sc-412779-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
CEMIP(细胞迁移诱导型透明质酸酶 1)编码一种可分泌且可在细胞内存在的透明质酸结合蛋白,通过促进透明质酸的解聚与周转来调控细胞外基质重塑。CEMIP 通过调节透明质酸代谢,影响细胞黏附、运动性以及与基质/间质的相互作用,从而将基质动态变化与信号过程联系起来,例如与 EMT 相关的程序以及炎症微环境应答。CEMIP 表达的改变已在多种癌症背景中与肿瘤进展、侵袭和转移潜能相关;同时,它也因对基质稳态的影响而参与结缔组织及软骨相关的病理生理过程。这些特性使 CEMIP 成为在人源模型体系中研究由 ECM 驱动的细胞行为调控、组织重塑及疾病相关表型的有用靶点。
CEMIP CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CEMIP的表达。
CEMIP CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CEMIP基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CEMIP转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性CEMIP表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CEMIP位点,并能够研究内源性位点上依赖于CEMIP的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CEMIP表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CEMIP通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。