CDYLCRISPR激活质粒(h): sc-406624-ACT

人类 CDYL（chromodomain Y-like）是一种与染色质相关的共调节因子，能够结合组蛋白上被甲基化的赖氨酸，并参与转录的表观遗传调控。CDYL 通过其 chromodomain 以及类似巴豆酰辅酶 A 水合酶的活性，影响组蛋白巴豆酰化与乙酰化状态，促进异染色质形成、转录抑制以及发育相关基因程序的建立。CDYL 参与调控神经元分化、生殖细胞发育以及与 DNA 损伤相关的染色质重塑等通路，体现了其在维持基因组调控状态中的作用。CDYL 的表达或功能失调与转录网络改变有关，这些改变被报道见于神经发育表型以及癌症相关的表观遗传重编程，因此 CDYL 对于研究依赖染色质的基因调控机制具有重要意义。

CDYL CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CDYL的表达。

CDYL CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CDYL基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CDYL转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性CDYL表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CDYL位点，并能够研究内源性位点上依赖于CDYL的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CDYL表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CDYL通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。