Cdk8CRISPR激活质粒(h): sc-400577-ACT

CDK8 编码细胞周期蛋白依赖性激酶 8（Cdk8），它是 Mediator 激酶模块的催化亚基，可将多种信号输入整合到 RNA 聚合酶 II 依赖的转录过程中。Cdk8 通过调控 Mediator 活性并磷酸化与转录相关的因子，调节转录起始与延伸，从而塑造情境特异性的基因表达程序。借助这些功能，CDK8 参与调控细胞周期进程、分化、应激反应和炎症信号等通路，并与 Wnt/β-连环蛋白及其他致癌性转录网络发生串扰。CDK8 表达或活性失调已在多种疾病相关情境中与转录调控异常相关联，因此可作为研究转录重编程机制的重要节点。

Cdk8 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CDK8的表达。

Cdk8 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CDK8基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CDK8转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Cdk8表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CDK8位点，并能够研究内源性位点上依赖于Cdk8的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CDK8表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Cdk8通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。