Cdk7CRISPR激活质粒(h): sc-400665-ACT

人类 CDK7 基因编码细胞周期蛋白依赖性激酶 7（Cdk7）。Cdk7 是一种双功能酶：一方面在 CDK7–Cyclin H–MAT1 复合物中充当 CDK 激活激酶（CAK），另一方面也是通用转录因子 TFIIH 的核心组分。Cdk7 通过磷酸化 RNA 聚合酶 II 的 C 端结构域（CTD）并激活细胞周期 CDK，协调转录起始、启动子近端暂停释放以及有序的细胞周期推进。CDK7 的活性与 DNA 损伤应答信号以及转录偶联的核苷酸切除修复紧密耦合，从而将基因组维护与细胞命运决策联系起来。在增殖状态和致癌性转录网络的研究中，CDK7 依赖的转录程序与细胞周期控制的失调常被重点关注，因此 CDK7 被视为进行机制性通路解析的高价值关键节点。

Cdk7 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CDK7的表达。

Cdk7 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CDK7基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CDK7转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Cdk7表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CDK7位点，并能够研究内源性位点上依赖于Cdk7的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CDK7表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Cdk7通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。