CD9CRISPR激活质粒(h): sc-400252-ACT

人类 CD9 基因编码一种四跨膜细胞表面蛋白（tetraspanin），可组织富含四跨膜蛋白的微结构域，并调控包括整合素和生长因子受体在内的伴侣受体的分布与信号传导。通过这些膜上组装体，CD9 影响细胞黏附、迁移、膜融合事件以及细胞外囊泡的生物发生，从而塑造与细胞骨架动态和细胞间通信相关的通路。CD9 被广泛用作与外泌体相关的标志物，并因其对细胞–细胞及细胞–基质相互作用的影响而与炎症、纤维化以及肿瘤细胞播散等过程有关。因此，扰动 CD9 的表达有助于解析膜支架结构如何影响信号特异性以及人类模型系统中的细胞表型。

CD9 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CD9的表达。

CD9 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CD9基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CD9转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性CD9表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CD9位点，并能够研究内源性位点上依赖于CD9的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CD9表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CD9通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。