CD3-γCRISPR激活质粒(h): sc-402537-ACT

CD3G 编码 CD3-γ，它是 T 细胞受体（TCR）-CD3 复合物的关键组成成分，负责将抗原识别与细胞内信号转导相耦联。CD3-γ 通过与 CD3δ、CD3ε 和 CD3ζ 组装，帮助启动依赖磷酸化的信号级联反应，涉及 LCK、ZAP70 以及下游的 MAPK、NF-κB 和 NFAT 通路，从而调控 T 细胞活化、增殖和细胞因子产生。CD3G 的表达或功能异常会扰乱胸腺细胞发育并改变 TCR 信号阈值，使该基因与免疫失衡表型及免疫缺陷相关机制建立联系。作为 TCR 复合物的核心亚基之一，CD3-γ 在淋巴细胞生物学、适应性免疫信号传导，以及塑造炎症刺激应答的通路串扰研究中被广泛关注。

CD3-γ CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CD3G的表达。

CD3-γ CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CD3G基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CD3G转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性CD3-γ表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CD3G位点，并能够研究内源性位点上依赖于CD3-γ的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CD3G表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CD3-γ通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。