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CD151CRISPR激活质粒(h) | sc-401969-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
CD151(四跨膜蛋白-24,tetraspanin-24)是一种人类细胞表面的四跨膜蛋白,能够组织四跨膜蛋白富集微域,并调控其伴侣受体的转运与信号传导,尤以与层粘连蛋白结合的整合素最为突出,如 ITGA3/ITGB1 和 ITGA6/ITGB4。通过这些复合体,CD151 影响细胞–细胞及细胞–基质黏附、细胞骨架重塑和定向迁移,从而作用于包括上皮完整性、血管生成反应以及免疫细胞运动性在内的多种过程。CD151 相关信号与黏着斑动力学相互交织,并与肌动蛋白调控及受体串话相关的下游通路发生交汇,在多种细胞情境中塑造侵袭性行为。在实验体系中,CD151 表达失衡或四跨膜蛋白–整合素耦联改变,已与肿瘤细胞播散、转移能力以及血管重塑等相关表型有关。
CD151 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CD151的表达。
CD151 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CD151基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CD151转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性CD151表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CD151位点,并能够研究内源性位点上依赖于CD151的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CD151表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CD151通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。