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CCDC89CRISPR激活质粒(h) | sc-408069-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
CCDC89(卷曲螺旋结构域蛋白89)编码一种预测具有卷曲螺旋结构的蛋白,可能参与细胞骨架组织以及支持细胞内结构与信号传导的蛋白—蛋白相互作用网络。卷曲螺旋蛋白常发挥支架作用,影响细胞器定位、囊泡运输和应激反应相关通路,因此推测CCDC89可能调控细胞过程的空间协调。来自多种基因组学数据集的表达与变异层面关联提示,CCDC89或与增殖相关及神经生物学背景中所见的转录程序失调有关,这也促使研究者在疾病相关细胞模型中开展机制研究。阐明CCDC89如何影响通路连接方式,有助于明确其对细胞状态转换、黏附/运动表型以及蛋白质稳态的下游影响。
CCDC89 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CCDC89的表达。
CCDC89 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CCDC89基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CCDC89转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性CCDC89表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CCDC89位点,并能够研究内源性位点上依赖于CCDC89的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CCDC89表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CCDC89通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。