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caveolin-1CRISPR激活质粒(m) | sc-419479-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
小鼠 Cav1 编码洞蛋白-1(caveolin-1),这是一种洞小窝(caveolae)的支架蛋白,可组织膜微域并调控内吞作用、机械力转导以及脂质稳态。洞蛋白-1 通过包括整合素/FAK–SRC、MAPK/ERK、PI3K–AKT 和 eNOS 在内的通路调节信号传导,从而影响细胞黏附、迁移以及依赖一氧化氮的血管反应。在免疫与基质细胞区室中,Cav1 会影响细胞因子信号与囊泡运输;而在脂肪组织与内皮组织中,它参与脂质处理与屏障功能的维持。洞蛋白-1 表达或洞小窝动力学的失调与纤维化反应改变、代谢表型变化、肺与血管功能障碍,以及情境依赖的肿瘤细胞侵袭和转移有关,支持其在疾病机制研究中的广泛应用价值。
caveolin-1 CRISPR激活质粒(m)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Cav1的表达。
caveolin-1 CRISPR激活质粒(m)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的Cav1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于Cav1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性caveolin-1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的Cav1位点,并能够研究内源性位点上依赖于caveolin-1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Cav1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟caveolin-1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。