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CAMTA1CRISPR激活质粒(h) | sc-405328-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 CAMTA1 基因编码钙调蛋白结合型转录激活因子 1(calmodulin-binding transcription activator 1),这是一种位于细胞核内的 DNA 结合蛋白,可将 Ca2+/钙调蛋白信号与转录调控整合起来。CAMTA1 参与调控与神经元分化、突触功能以及细胞应激反应相关的基因表达程序,这与其在染色质相关的转录调控中的作用一致。CAMTA1 活性改变与神经发育表型和小脑功能障碍有关;此外,多项肿瘤分型研究也报道了影响 CAMTA1 的基因组改变,支持其作为疾病相关转录网络研究靶点的价值。这些特征使 CAMTA1 成为解析钙依赖性转录通路及其下游基因调控回路的一个有用节点。
CAMTA1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CAMTA1的表达。
CAMTA1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CAMTA1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CAMTA1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性CAMTA1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CAMTA1位点,并能够研究内源性位点上依赖于CAMTA1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CAMTA1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CAMTA1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。