CaM IIICRISPR激活质粒(h): sc-400953-ACT

人类 **CALM3** 基因编码钙调蛋白III（calmodulin III，CaM III），这是一种普遍表达的 Ca2+ 结合型传感器，可将细胞内钙信号转化为酶活性、离子通道功能以及基因表达的协调变化。CaM III 与 Ca2+ 结合后，会调控包括 CaMKs（钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶）、钙调神经磷酸酶（calcineurin）和磷酸二酯酶在内的关键效应分子，从而整合神经元兴奋性、心脏传导、分泌以及细胞骨架重塑等过程中的信号。依赖 CALM3 的通路与 MAPK/ERK 及 CREB 介导的转录程序发生交叉，进而影响细胞周期进程、分化与应激反应。Ca2+/钙调蛋白信号的失调与心律失常易感性、神经发育相关表型以及癌症相关的信号网络重编程有关，体现了其在机制研究中的广泛重要性。

CaM III CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CALM3的表达。

CaM III CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CALM3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CALM3转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性CaM III表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CALM3位点，并能够研究内源性位点上依赖于CaM III的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CALM3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CaM III通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。