calsequestrin 1CRISPR激活质粒(h): sc-403375-ACT

CASQ1 编码肌钙集蛋白 1（calsequestrin 1），这是一种高容量 Ca2+ 结合蛋白，定位于快肌型骨骼肌中肌浆网（SR）腔内。肌钙集蛋白 1 通过缓冲并释放腔内 Ca2+ 来支持兴奋–收缩耦联，并帮助塑造由雷诺定受体（ryanodine receptor）介导的 Ca2+ 释放动力学，从而影响钙稳态、肌肉收缩力以及 SR Ca2+ 储库的稳定性。CASQ1 功能受扰与骨骼肌细胞内 Ca2+ 信号传导和应激反应改变有关，为研究 Ca2+ 依赖性通路、蛋白稳态（proteostasis）以及肌纤维生理提供了机制切入点。作为 SR Ca2+ 缓冲的核心调控因子，CASQ1 常用于肌肉功能障碍模型的研究，因为异常的 Ca2+ 处理会促成相关病理发生。

calsequestrin 1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CASQ1的表达。

calsequestrin 1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CASQ1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CASQ1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性calsequestrin 1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CASQ1位点，并能够研究内源性位点上依赖于calsequestrin 1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CASQ1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟calsequestrin 1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。