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CalgizzarinCRISPR激活质粒(h) | sc-404169-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
S100A11 编码 calgizzarin(钙结合蛋白),属于 S100 家族。该蛋白可与磷脂及细胞骨架成分结合,从而调控膜动态、细胞运动以及应激适应性信号传导。Calgizzarin 参与多种 Ca2+ 依赖过程,包括肌动蛋白重塑、囊泡运输以及细胞周期进程的协调,且常在上皮可塑性与炎症微环境相关研究中被关注。多种癌症与纤维化模型显示,S100A11 表达异常与增殖失调、与侵袭相关的表型以及对凋亡的耐受有关。作为一种枢纽样的钙传感器,calgizzarin 为探究钙信号如何与细胞骨架组织及转录程序相整合提供了机制切入点。
Calgizzarin CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性S100A11的表达。
Calgizzarin CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的S100A11基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于S100A11转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Calgizzarin表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的S100A11位点,并能够研究内源性位点上依赖于Calgizzarin的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在S100A11表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Calgizzarin通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。