C9orf41CRISPR激活质粒(h): sc-409368-ACT

CARNMT1 编码人类 C9orf41 蛋白，这是一种依赖 S-腺苷-L-甲硫氨酸（SAM）的甲基转移酶。该蛋白通过将帽结构邻近的腺苷（Am）甲基化为 N6,2′-O-二甲基腺苷（m6Am），参与对特定转录本 5′ 端的修饰，从而与 RNA 代谢相关。这种表转录组修饰可影响 mRNA 的稳定性和翻译效率，使 C9orf41 的活性与转录后基因调控及蛋白质稳态（proteostasis）相联系。在多种癌症与神经系统疾病数据集中，RNA 帽结构相关甲基化异常以及 RNA 加工通路失调是反复出现的特征，因此 CARNMT1 可作为研究转录—翻译耦联机制的一个有用节点。调控 C9orf41 的表达有助于探究 m6Am 动态如何塑造细胞状态转变、应激反应以及通路特异性的基因表达程序。

C9orf41 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CARNMT1的表达。

C9orf41 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CARNMT1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CARNMT1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性C9orf41表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CARNMT1位点，并能够研究内源性位点上依赖于C9orf41的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CARNMT1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟C9orf41通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。