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C9orf152CRISPR激活质粒(h2) | sc-415979-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
人类基因 C9orf152 编码一种在很大程度上尚未被充分表征的蛋白质,但越来越多的证据表明它可能参与细胞稳态与多种调控过程;其表达模式与共表达网络提示该蛋白在细胞核与细胞质中均可能发挥功能。转录组学分析显示,C9orf152 可能涉及与细胞周期调控和应激反应相关的信号传导及基因表达控制通路,因此可作为解析注释不足的调控节点的有用靶点。在多类疾病相关数据集中(包括癌症相关表达谱)均有报道 C9orf152 表达发生改变,提示其与转录程序失调及细胞适应的机制研究相关。通过对 C9orf152 进行基因编辑,可通过基因敲除或精确变体建模开展功能解析,从而在人体细胞系统中描绘其下游通路效应、蛋白互作网络以及表型—基因型关系。
C9orf152 CRISPR激活质粒(h2)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性C9orf152的表达。
C9orf152 CRISPR激活质粒(h2)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的C9orf152基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于C9orf152转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性C9orf152表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的C9orf152位点,并能够研究内源性位点上依赖于C9orf152的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在C9orf152表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟C9orf152通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。