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C20orf54CRISPR激活质粒(h) | sc-405094-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
SLC52A3 编码 C20orf54,这是一种高亲和力的核黄素(维生素 B2)转运蛋白,负责介导细胞摄取核黄素,以支持 FAD 和 FMN 的生物合成。通过调控黄素辅因子的可用性,C20orf54 影响线粒体氧化代谢、氧化还原稳态以及依赖黄素蛋白的相关通路,包括电子传递与脂肪酸氧化。SLC52A3 活性异常与核黄素转运缺陷及其下游代谢和神经生理功能障碍有关,因此在研究营养物质转运、线粒体生物能量学以及应激反应信号传导方面具有重要意义。
C20orf54 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SLC52A3的表达。
C20orf54 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的SLC52A3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于SLC52A3转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性C20orf54表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的SLC52A3位点,并能够研究内源性位点上依赖于C20orf54的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SLC52A3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟C20orf54通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。