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C1orf68CRISPR激活质粒(h) | sc-403506-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 C1orf68(1 号染色体开放阅读框 68)编码一种表征不足的蛋白质,功能注释有限;现有证据逐渐显示其在不同组织及疾病状态下呈现情境依赖性的表达。尽管其具体分子通路仍有待进一步阐明,转录本层面的研究提示 C1orf68 可能参与与细胞分化、应激反应以及基因表达网络调控相关的细胞程序。多组学数据集中已报道其表达模式发生改变,支持其作为候选基因用于疾病相关细胞模型中信号传导与转录调控机制研究。研究 C1orf68 有助于阐明这些研究较少的开放阅读框基因如何促进通路重塑与表型差异。
C1orf68 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性C1orf68的表达。
C1orf68 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的C1orf68基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于C1orf68转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性C1orf68表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的C1orf68位点,并能够研究内源性位点上依赖于C1orf68的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在C1orf68表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟C1orf68通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。