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C1orf115CRISPR激活质粒(h) | sc-413237-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
C1orf115CRISPR激活质粒(h2) | sc-413237-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
C1orf115(人)编码一种表征不足的蛋白,现有功能注释有限,提示其作用可能具有情境依赖性,且更适合通过扰动实验来厘清。现有转录组与蛋白质组数据集显示其表达具有细胞类型特异性,支持在谱系分化、应激适应程序或其他受调控的细胞状态中开展研究。由于其与经典信号通路之间的机制性联系仍未完全明确,调控 C1orf115 的表达有助于绘制下游转录响应以及蛋白相互作用网络。诸如 C1orf115 这类未充分表征的开放阅读框,其表达改变特征常在肿瘤与神经生物学数据集中被调查,因此适用于探索与疾病相关的通路研究,但不预设因果关系。
C1orf115 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性C1orf115的表达。
C1orf115 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的C1orf115基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于C1orf115转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性C1orf115表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的C1orf115位点,并能够研究内源性位点上依赖于C1orf115的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在C1orf115表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟C1orf115通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。