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C15orf39CRISPR激活质粒(h) | sc-412724-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
C15orf39 编码一种表征不足的人类蛋白,现有功能注释有限,但已有证据支持其参与维持细胞基本稳态的过程,例如基因表达调控和蛋白质周转。转录组与蛋白组层面的观察提示,C15orf39 可能参与影响细胞周期进程、应激反应以及线粒体或代谢适应的相关通路,具体作用取决于细胞环境。在部分与疾病相关的数据集中也报道了 C15orf39 表达异常,提示其可能与增殖失调及基因组维护程序相关。因此,在人源细胞模型中对 C15orf39 进行可控上调,有助于探究其下游转录网络与通路依赖性。
C15orf39 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性C15orf39的表达。
C15orf39 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的C15orf39基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于C15orf39转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性C15orf39表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的C15orf39位点,并能够研究内源性位点上依赖于C15orf39的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在C15orf39表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟C15orf39通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。