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C14orf37CRISPR激活质粒(h) | sc-414550-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
C14orf37(人)编码一种表征不足的蛋白,功能注释有限;现有证据提示它可能参与对基因表达及细胞稳态的情境依赖性调控。转录本水平的研究显示,C14orf37 的表达会在不同组织及实验扰动条件下发生变化,因此可作为研究转录调控与细胞状态转换的候选位点。尽管其在通路中的明确定位仍不完整,来自基因组学与表达谱分析的新兴关联已将 C14orf37 与增殖、分化以及应激响应信号等相关生物学程序联系起来。因此,C14orf37 值得开展机制研究,以阐明内源性基因剂量与疾病相关细胞模型中观察到的表型之间的关系。
C14orf37 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性C14orf37的表达。
C14orf37 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的C14orf37基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于C14orf37转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性C14orf37表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的C14orf37位点,并能够研究内源性位点上依赖于C14orf37的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在C14orf37表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟C14orf37通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。