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BUBR1CRISPR激活质粒(h) | sc-403807-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
BUB1B 编码 BUBR1,这是纺锤体组装检查点(spindle assembly checkpoint, SAC)的核心组分之一。该检查点通过监测动粒–微管附着情况,并通过有丝分裂检查点复合体调控 APC/C 活性,从而保障染色体的正确分离。BUBR1 参与有丝分裂时序控制、姐妹染色单体黏连以及错误校正,因此在细胞分裂过程中维持基因组稳定性。BUB1B/BUBR1 功能失调与染色体不稳定性和非整倍体相关,这些特征常见于癌症生物学研究以及影响细胞周期控制的发育障碍。作为检查点调控因子,BUBR1 也常被用作机制层面的关键节点,用于解析有丝分裂应激反应及与增殖相关的表型。
BUBR1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性BUB1B的表达。
BUBR1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的BUB1B基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于BUB1B转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性BUBR1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的BUB1B位点,并能够研究内源性位点上依赖于BUBR1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在BUB1B表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟BUBR1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。