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BMP-8ACRISPR激活质粒(h) | sc-406589-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 BMP8A 基因编码骨形态发生蛋白 8A(BMP-8A),这是一种分泌型 TGF-β 超家族配体,可通过 BMP I/II 型丝氨酸/苏氨酸激酶受体传递信号,激活依赖 SMAD1/5/8 的转录程序。BMP-8A 参与发育模式建立、组织分化以及细胞外基质重塑的调控;其下游还可与 MAPK 通路发生串扰,从而影响细胞增殖与谱系承诺。在细胞模型中,BMP8A 相关信号常在成骨与生殖生物学等背景下进行研究;BMP 通路活性改变与形态发生失调及类似纤维化的表型有关。对 BMP 信号组成成分的扰动(包括配体可用性以及受体‑SMAD 动力学)与发育障碍机制研究及通路驱动的细胞命运决定变化密切相关。
BMP-8A CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性BMP8A的表达。
BMP-8A CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的BMP8A基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于BMP8A转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性BMP-8A表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的BMP8A位点,并能够研究内源性位点上依赖于BMP-8A的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在BMP8A表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟BMP-8A通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。