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BMP-3CRISPR激活质粒(h) | sc-404417-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
BMP3 编码骨形态发生蛋白 3(BMP-3)。BMP-3 是 TGF-β 超家族的分泌型成员,在骨微环境中调节成骨与成软骨分化。与许多具有促成骨诱导作用的 BMP 不同,BMP-3 常被描述为 BMP 驱动信号的拮抗因子,可影响依赖 SMAD 的转录程序以及细胞外基质重塑。通过这些通路层面的相互作用,BMP-3 参与调控骨骼发育、骨密度稳态以及基质/间质细胞的命运决定。在异常矿化和组织重塑等情境中已有 BMP3 表达改变的报道,因此它与肌肉骨骼及基质生物学的机制研究密切相关。
BMP-3 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性BMP3的表达。
BMP-3 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的BMP3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于BMP3转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性BMP-3表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的BMP3位点,并能够研究内源性位点上依赖于BMP-3的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在BMP3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟BMP-3通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。