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BICD1CRISPR激活质粒(h) | sc-410704-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
BICD1CRISPR激活质粒(h2) | sc-410704-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
BICD1(bicaudal D homolog 1)是一种卷曲螺旋结构(coiled-coil)的适配蛋白,可将细胞质动力蛋白 dynein–dynactin 马达与货物连接起来,协调沿微管负端方向的运输。它参与囊泡和细胞器的定位、高尔基体的组织以及与中心体相关的转运,从而支持细胞极性建立和有丝分裂进程等过程。通过在细胞内运输网络中的作用,BICD1 还能通过控制受体与内体的移动及其空间组织来影响信号传导的动态变化。dynein 适配蛋白功能失调与细胞应激反应以及神经发育和神经退行性研究中观察到的多种表型广泛相关。
BICD1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性BICD1的表达。
BICD1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的BICD1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于BICD1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性BICD1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的BICD1位点,并能够研究内源性位点上依赖于BICD1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在BICD1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟BICD1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。