beta SynucleinCRISPR激活质粒(h): sc-400894-ACT

人类 SNCB 基因编码 β-突触核蛋白（beta synuclein），这是一种位于突触前、存在于胞质中的蛋白质，可调节神经元中突触小泡动力学、神经递质释放以及与膜相关蛋白的运输。作为突触核蛋白家族成员，它参与蛋白质–脂质相互作用，并影响维持蛋白稳态（proteostasis）的相关通路，这些通路在突触处调控蛋白聚集、周转与应激反应。突触核蛋白生物学的异常与神经退行性过程密切相关；SNCB 因其与 α-突触核蛋白的相互作用、对突触韧性的影响以及对神经元易损性的贡献而受到研究关注。研究中常利用 SNCB 来探究突触功能机制、神经元分化过程，以及与帕金森病和相关突触核蛋白病（synucleinopathies）有关的通路。

beta Synuclein CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SNCB的表达。

beta Synuclein CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的SNCB基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于SNCB转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性beta Synuclein表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的SNCB位点，并能够研究内源性位点上依赖于beta Synuclein的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SNCB表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟beta Synuclein通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。