beta ActinCRISPR激活质粒(h2): sc-400000-ACT-2

人类ACTB基因编码β-肌动蛋白，这是一种高度保守的细胞骨架蛋白，可聚合形成微丝，从而驱动并维持细胞形态、极性、收缩性与运动性。β-肌动蛋白的动态变化是肌动蛋白细胞骨架重塑通路的核心，这些通路协调黏着斑周转、机械转导、胞质分裂和囊泡运输，并且还可通过肌动蛋白依赖的核内过程参与转录调控。ACTB本身或其互作网络的扰动与发育障碍以及癌细胞侵袭与转移中观察到的细胞骨架组织异常相关，凸显其在研究基因型—表型关系中的价值。以ACTB为靶点的基因编辑与功能基因组学流程常用于解析肌动蛋白调控的信号通路、在活细胞成像中量化细胞骨架表型，并为通路扰动研究建立稳健的参照背景。

beta Actin CRISPR激活质粒（h2）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ACTB的表达。

beta Actin CRISPR激活质粒（h2）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ACTB基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ACTB转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性beta Actin表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ACTB位点，并能够研究内源性位点上依赖于beta Actin的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ACTB表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟beta Actin通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。