BCMO1CRISPR激活质粒(h2): sc-405374-ACT-2

人类BCO1基因编码β-胡萝卜素15,15′-单加氧酶1（BCMO1），这是一种位于细胞质、依赖非血红素铁的双加氧酶，可催化膳食β-胡萝卜素在中央位点裂解生成全反式视黄醛；全反式视黄醛是视黄酸及视觉发色团的重要前体。BCMO1通过调控类维生素A（视黄类）物质的可利用性，影响由RAR/RXR依赖的转录程序介导的视黄类信号传导，从而调节上皮分化、脂质代谢与氧化应激反应。BCO1的遗传变异或表达水平改变与个体间原维生素A转化效率差异相关，并与维生素A营养状态、代谢表型以及视网膜/眼部生物学等多种性状有关。针对BCO1/BCMO1的基因编辑工具可用于在相关人源细胞模型中开展机制研究，解析类胡萝卜素代谢、视黄类稳态及其下游转录网络，并支持对饮食–基因相互作用以及与脂质处理和抗氧化防御之间通路串话的研究。

BCMO1 CRISPR激活质粒（h2）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性BCO1的表达。

BCMO1 CRISPR激活质粒（h2）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的BCO1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于BCO1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性BCMO1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的BCO1位点，并能够研究内源性位点上依赖于BCMO1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在BCO1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟BCMO1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。