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ATRCRISPR激活质粒(m) | sc-434115-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
小鼠 Atr 基因编码 ATR,这是一种 PI3K 样丝氨酸/苏氨酸激酶,在复制压力条件下协调 DNA 损伤应答。ATR 在被 RPA 包被的单链 DNA 上被激活,并通过 CHK1 等效应分子传递信号,以稳定停滞的复制叉、调控复制起点起始(origin firing),并执行 S 期内检查点以及 G2/M 检查点。该通路通过促进 DNA 修复并调控细胞周期进程来维持基因组完整性,同时与同源重组、复制叉保护以及凋亡调控等过程相互交织。ATR 信号失调与基因组不稳定等表型相关,因此在癌症生物学以及与 DNA 损伤检查点控制受损有关的发育性疾病研究中受到广泛关注。
ATR CRISPR激活质粒(m)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Atr的表达。
ATR CRISPR激活质粒(m)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的Atr基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于Atr转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性ATR表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的Atr位点,并能够研究内源性位点上依赖于ATR的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Atr表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ATR通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。