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ATP-citrate synthase双切口酶质粒(h) | sc-403146-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
ATP-citrate synthase双切口酶质粒(h2) | sc-403146-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
人类 **ACLY** 基因编码 ATP-柠檬酸合成酶(ATP-citrate synthase),这是一种位于细胞质的酶,可将柠檬酸和 CoA 转化为乙酰辅酶 A(acetyl-CoA)和草酰乙酸,从而把线粒体的碳流与脂质生物合成及蛋白乙酰化连接起来。通过为从头脂肪酸与胆固醇合成以及组蛋白乙酰化提供乙酰辅酶 A,ACLY 将营养状态与代谢和表观遗传调控整合在一起。ACLY 的活性与糖酵解、TCA 循环以及固醇调控网络相互衔接,影响膜生物发生与氧化还原平衡。ACLY 的表达或通量失衡与癌症生物学、胰岛素抵抗和炎症信号中观察到的代谢状态改变相关,因此它是研究代谢依赖性表型的一个有用靶点。
ATP-citrate synthase 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 ACLY 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对ACLY内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏ACLY的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了ACLY基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。