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ATG7双切口酶质粒(m) | sc-428805-NIC | 20 µg | CNY3084.00 |
小鼠 Atg7 编码 ATG7,这是一种类似 E1 的酶,可激活 ATG12 和 LC3/ATG8 家族蛋白,从而驱动形成自噬体所必需的类泛素共轭反应。ATG7 在巨自噬中处于核心地位,通过协调货物隔离与溶酶体周转来维持蛋白质稳态和细胞器质量控制(包括线粒体自噬)。借助其在营养感知与细胞应激适应中的作用,ATG7 影响免疫信号、代谢与神经生物学;其失调常在神经退行性变、炎症表型以及与癌症相关的应激反应等背景下被研究。因此,Atg7 依赖的自噬通量常被用作解析连接细胞内降解与组织稳态通路的常用读出指标。
ATG7 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Atg7 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Atg7内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Atg7的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Atg7基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。