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ARH3双切口酶质粒(m) | sc-430308-NIC | 20 µg | CNY3084.00 |
Adprhl2 编码 ARH3,这是一种单 ADP-核糖水解酶,可逆转丝氨酸连接的 ADP-核糖基化,以及 DNA 损伤信号过程中产生的相关聚(ADP-核糖)(poly(ADP-ribose))代谢产物。通过从被修饰蛋白上去除 ADP-核糖,ARH3 有助于精细调控 PARP 依赖性应答,维持 NAD⁺/ADP-核糖稳态,并在复制压力和氧化应激下支持基因组稳定性。在小鼠细胞中,ARH3 的功能与染色质调控及影响细胞存活和炎症相关信号的应激反应通路相互交织。ADP-核糖基化周转失衡与神经退行性表型及对基因毒性应激的敏感性升高有关,因此 Adprhl2 是开展 DNA 修复与细胞抗逆机制研究的一个有用关键节点。
ARH3 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Adprhl2 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Adprhl2内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Adprhl2的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Adprhl2基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。