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ARF1双切口酶质粒(h) | sc-401608-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
ARF1双切口酶质粒(h2) | sc-401608-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
ADP-核糖基化因子1(ARF1)是一种小GTP酶,可在GDP结合态与GTP结合态之间循环转换,从而调控膜运输与细胞器动态,尤其是在高尔基体与内体系统中。活化的ARF1可招募被覆蛋白及衔接蛋白以驱动囊泡出芽,协调磷脂酰肌醇代谢,并通过下游效应因子支持细胞骨架重塑。通过这些作用,ARF1参与分泌通路通量、受体回收以及与细胞生长和迁移相关的信号转导。ARF1依赖的运输过程一旦失调,在癌症模型中与增殖改变和侵袭性表型相关,并在疾病相关背景下与神经元和免疫细胞功能紊乱有关。
ARF1 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 ARF1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对ARF1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏ARF1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了ARF1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。