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APLP1CRISPR激活质粒(h) | sc-403937-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 APLP1(淀粉样β前体蛋白样蛋白1)是一种 I 型跨膜糖蛋白,在神经元中富集,功能上与 APP 基因家族相关。它参与突触的形成与维持、神经突起生长以及活动依赖性的信号传导,其中一部分作用通过受调控的蛋白水解以及由其胞内结构域介导的转录效应来实现。APLP1 还参与细胞—细胞黏附过程和运输通路,从而塑造神经元连接与突触可塑性。APP 家族加工失调与突触功能障碍使 APLP1 相关通路与神经退行性疾病和神经发育表型研究中的机制相联系,因此对解析神经元信号网络具有重要意义。
APLP1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性APLP1的表达。
APLP1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的APLP1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于APLP1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性APLP1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的APLP1位点,并能够研究内源性位点上依赖于APLP1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在APLP1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟APLP1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。