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Apg-1双切口酶质粒(h) | sc-403942-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
Apg-1双切口酶质粒(h2) | sc-403942-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
HSPA4L 编码 Apg-1,它是 HSP70 家族成员之一,作为一种 ATP 依赖性的分子伴侣,在基础状态及应激条件下支持蛋白质稳态(proteostasis)。Apg-1 与共伴侣蛋白协同参与蛋白质折叠、防止聚集以及质量控制过程,因此与细胞应激反应和蛋白质内稳态的维持密切相关。由于其在未折叠蛋白处理和蛋白毒性应激方面发挥作用,HSPA4L 与细胞生存、分化以及对环境损伤的适应等相关通路具有一定关联。包含 Apg-1 在内的伴侣网络一旦失调,已被发现与应激耐受性改变以及蛋白质错误折叠表型相关,这些现象在肿瘤生物学、神经退行性疾病模型,以及生殖与发育相关研究中均有所涉及。
Apg-1 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 HSPA4L 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对HSPA4L内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏HSPA4L的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了HSPA4L基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。