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AOX1CRISPR激活质粒(h) | sc-403997-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 AOX1 基因编码醛氧化酶 1(aldehyde oxidase 1),这是一种钼依赖性的胞质酶,在外源性物质Ⅰ相代谢过程中催化多种醛类及含氮杂环化合物的氧化反应。AOX1 通过副产物形式生成活性氧(ROS),并参与清除脂质过氧化过程中产生的内源性醛类,从而参与细胞氧化还原稳态并与更广泛的代谢网络相互连接。AOX1 表达水平或活性发生变化会改变细胞对氧化应激的敏感性并影响代谢表型,因此与肝功能及解毒能力研究密切相关。醛类处理失衡与炎症及纤维化过程有关联,这也支持在代谢性与氧化性损伤模型中将 AOX1 作为调节因子进行研究。
AOX1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性AOX1的表达。
AOX1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的AOX1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于AOX1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性AOX1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的AOX1位点,并能够研究内源性位点上依赖于AOX1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在AOX1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟AOX1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。