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ANP32DCRISPR激活质粒(h) | sc-410569-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
ANP32D(酸性核磷蛋白32家族成员D)是人类ANP32家族的一种核蛋白,参与染色质相关的基因表达调控以及与RNA相关的过程。ANP32蛋白的特征是含有富亮氨酸重复序列(leucine-rich repeats)和酸性C端区域,这些结构可影响参与转录控制、核质动态以及细胞应激反应的蛋白–蛋白相互作用。通过这些功能,ANP32D与调控细胞增殖和凋亡的通路相关;在表观遗传与转录程序发生紊乱的情境中,人们也探索了其表达改变的意义。研究ANP32D有助于阐明核内磷蛋白网络如何塑造细胞状态转换以及与疾病相关的基因调控回路。
ANP32D CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ANP32D的表达。
ANP32D CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的ANP32D基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于ANP32D转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性ANP32D表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的ANP32D位点,并能够研究内源性位点上依赖于ANP32D的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ANP32D表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ANP32D通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。