Annexin IVCRISPR激活质粒(h): sc-402134-ACT

人类 ANXA4 基因编码膜联蛋白 IV（annexin IV），这是一种 Ca²⁺ 依赖性的磷脂结合蛋白，可与细胞膜结合，从而调控膜运输、离子通道活性以及皮质细胞骨架的组织。膜联蛋白 IV 参与多种与钙信号相关的过程，包括囊泡融合、上皮极化，以及在应激反应中维持膜完整性。已有研究报道 ANXA4 表达异常与多种疾病相关，尤其是在上皮来源肿瘤中，人们常从其与侵袭、抗凋亡能力以及细胞-细胞连接重塑的关系角度进行研究。这些特性使膜联蛋白 IV 成为研究人类细胞中膜相关信号网络和钙调控动态过程的一个重要节点。

Annexin IV CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ANXA4的表达。

Annexin IV CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ANXA4基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ANXA4转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Annexin IV表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ANXA4位点，并能够研究内源性位点上依赖于Annexin IV的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ANXA4表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Annexin IV通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。